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病毒技术平台

    将外源基因有计划有目的的导入哺乳动物细胞内,使外源基因进行表达或者利用RNA干扰技术降低某些基因的表达是研究基因表达,功能和调控机制的重要研究手段。基因转染的方法常用磷酸钙法、脂质体介导法、电击法(电穿孔技术)DEAE葡聚糖法、细胞显微注射法等,这均属于物理、化学方法的转基因技术,此法转入至细胞内的基因一般均不与细胞染色体发生整合,而是在细胞质呈现暂时性表达,但不持久,随时间推移而逐渐减弱或消失,而且对于一些原代细胞和悬浮细胞利用传统的转染方法很难实现,为了解决这个问题并且使目的基因进入细胞后能与细胞基因组DNA发生整合、产生永久性的表达,常用病毒作为外源基因导入的载体,通过病毒感染将外源基因导入受体细胞中。

    逆转录病毒是第一个用于基因转移的病毒载体,它作为基因转移的载体具有其它载体无可比拟的优点,如转染的细胞范围广泛,能感染不同生物种类的各种细胞类型;能准确地将载体中的目的基因整合到受体细胞基因组中,并且能够稳定高效地表达;高效感染分裂的细胞,感染率可达到100%。与腺病毒系统相比,逆转录病毒系统有以下的优点:(l)大多数肿瘤细胞都具备分裂特征,其有较广泛的宿主范围;(2)可以稳定地整合到宿土细胞的基因组中,从而更稳定持久地表达目的基因;(3)此外,腺病毒进入宿主要识别特异性受体和引起机体免疫反应,而逆转录病毒无此限制。

    慢病毒作为一种特殊的逆转录病毒,与通常使用的逆转录病毒载体和腺病毒载体比较,具有可感染分裂细胞及非分裂细胞、转移基因片段容量较大、目的基因表达时间长、不易诱发宿主免疫反应等优点。下表列举了各种病毒转染技术的优缺点:

    目前华师大生物医学研究所病毒技术平台在生物安全水平上建立生物安全二类实验室,在技术上已经建立了成熟的逆转录病毒和慢病毒的包装,感染等技术系统。将目的基因或者shRNA克隆入相应的载体可以实现该目的基因或者shRNA逆转录病毒和慢病毒的包装,从而实现其在不同细胞内表达的目的,为今后的各项研究如基因敲除小鼠等技术平台奠定了基础。

 

 

 

Lentivirus 感染3T3 细胞
Lentivirus 感染lincap 细胞
Retrovirus 感染HMEC细胞
Retrovirus 感染HUVEC细胞

 

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